Le Microscope Photonique en transmission.

(LES COMPOSANTS DU MICROSCOPE)

Les modulateurs pupillaires

Le contraste de Phase de Zernike

Parfois les objets à examiner ne présentent entre eux ou avec leur environnement que de très petites différences d'indice de réfraction et seule une très petite différence de la phase de la lumière qui les traverse permet de les différencier, ils sont appelés pour cela objets de phase. Leur principale caractéristique est qu'en éclairage en fond clair on ne peut pas ou difficilement les discerner à moins qu'ils ne présentent une épaisseur notable. (Objets d'amplitude)

Une première solution à ce problème consiste à colorer ces objets ce qui les transforme en objets d'absorption. Mais la coloration a pour premier inconvénient de fixer et de tuer les cellules.

C'est en 1930 que Frits Zernike (1888-1966) invente son procédé de contraste de phase qui permet de voir au microscope le comportement des cellules vivantes et des bactéries ce qui lui vaudra le Prix Nobel de Physique en 1953.

D'après la théorie d'ABBE, l'image issue d'un objet microscopique transparent est formée de la juxtaposition de deux images différentes. La première directe issue des parties uniformes de l'objet et la seconde produite par la diffraction due aux irrégularités de l'objet.
Fritz Zernike a donc eu l'idée de produire artificiellement un décalage de phase entre ces deux images en apportant grâce à une lame de phase une avance (ou un retard: dans ce cas on a un contraste de phase négatif) de la phase de la première image qui se transforme en image d'amplitude .
Pour arriver à un tel résultat, le microscope doit être équipé d'un diaphragme annulaire sous le condenseur dont l'image se superpose exactement à la lame de phase annulaire également située dans la partie arrière de l'objectif.
Il doit y avoir autant de diaphragmes que d'objectifs et ils sont contenus dans une tourelle en sous-platine permettant leur centrage rigoureux grâce à un petit microscope auxiliaire monté à la place de l'oculaire.
Le dispositif d'Amici-Bertrand permet le même réglage si le microscope en est équipé.(Observation conoscopique)

Oeil de mouche
Fond Clair Obj 10 x	Contraste de Phase Obj 20 x
Cellules jugales et bactéries dans la salive
Contraste de Phase Obj 20 x

Microscope Nachet 300 Contraste de Phase Paralux Éclairage par LED Blanche